Наиболее часто используемым и востребованным в биомедицине стало лечение мультипотентными мезенхимальными стволовыми клетками (ММСК). С недавних пор активно ищутся способы применения ММСК в лечении терапии лучевых болезней.
«В экспериментах, где в работу берется культура клеток костного мозга мыши, возникает множество методических проблем, заставляющих каждую группу исследователей искать индивидуальный подход, как в нашем случае, — делится результатами исследований младший научный сотрудник лаборатории физико-химической и экологической патофизиологии ФГБНУ «НИИОПП» Федор Алексеевич Садовников. «На недавно прошедшем межинститутском научном семинаре, организованном Советом молодых ученых и специалистов, мной были представлены основные технологические особенности работы с культурой клеток костного мозга мыши, используемые в рамках наших экспериментов. По общепринятой лабораторной практике ММСК мыши принято выделять посредствам центрифугирования или шприцевой аспирации костномозговой субстанции, изымаемой из усеченного диафиза бедренной кости. Было обнаружено, что в процессе выделения на жизнеспособность и скорость адгезии клеток влияет температура, при которой происходила процедура изъятия костного мозга. При поддержании температуры ткани-источника и клеточной субстанции в диапазоне от 2 до 4 ℃ повышается выживаемость культуры в первые дни роста (в фазе адаптации). Морфология и процесс роста клеток ММСК, выделенных из костного мозга мыши, частично отличается от культур человеческой ткани. Особо значимым отличается процедура пассирования клеток. На заключительной стадии субкультивирования культура клеток ММСК мыши крайне плохо поддается обработке открепляющими ферментными препаратами. Нами была проделана работа по нахождению оптимальных условий ферментативной обработки клеток. В ходе попыток снижения длительности воздействия фермента на клетки в процессе снятия с субстратной поверхности был обнаружен положительный эффект от выдержки культуры в бессывороточной среде в течение 30-60 минут. После завершения инкубации, направленной на очистку от бычьей сыворотки, способствующей росту культуры, длительность ферментативной обработки снижалась с 30-40 минут до 15-20, что значительно увеличивало количество закрепившихся клеток на следующем после снятия пассаже. Также был отмечен еще один ключевой фактор, повлиявший на эффективность субкультивирования “нулевого” пассажа – равномерность распределения клеточной плотности. В местах высокого скопления клеток фермент “не справлялся” с межклеточным соединительным веществом, удерживающим клетки на поверхности культурального пластика, что увеличивало длительность воздействия фермента и снижало жизнеспособность».
На сегодняшний день методики по наращиванию клеточного материала человека стали более изученными и перетерпели качественные изменения с увеличением эффективности работы. Безусловно, исследования младшего научного сотрудника лаборатории физико-химической и экологической патофизиологии ФГБНУ «НИИОПП» Федора Алексеевича Садовникова внесут весомый вклад в поиск подхода к работе с культурой клеток костного мозга мыши в эксперименте.